Prinsipyo sa Eksperimento
Ang Hemoglobin electrophoresis nagtumong sa pag-ila ug pagkumpirma sa lainlaing normal ug abnormal nga hemoglobin.
Tungod sa lain-laing mga singil ug isoelectric nga mga punto sa lain-laing mga matang sa hemoglobin, sa usa ka pH buffer solusyon, sa diha nga ang isoelectric punto sa hemoglobin mao ang ubos pa kay sa pH sa buffer solusyon, hemoglobin nagdala sa usa ka negatibo nga bayad ug migrates ngadto sa anode sa panahon sa electrophoresis. Sa kasukwahi, ang hemoglobin nga adunay positibo nga karga mobalhin padulong sa katod.
Ubos sa usa ka piho nga boltahe ug pagkahuman sa usa ka piho nga oras sa electrophoresis, ang mga hemoglobin nga adunay lainlaing mga singil ug gibug-aton sa molekula nagpakita sa lainlaing mga direksyon ug katulin sa paglalin. Gitugotan niini ang pagbulag sa lahi nga mga sona, ug ang sunod nga colorimetric o electrophoretic scanning analysis mahimong himuon sa kini nga mga zone aron ma-ihap ang lainlaing mga hemoglobin. Ang labing kasagarang gigamit nga pamaagi mao ang pH 8.6 cellulose acetate membrane electrophoresis.
Sulod sa cytoplasm, ang ethylene glycol nga mga grupo (CHOH-CHOH) anaa sa glycogen o polysaccharide substances (sama sa mucopolysaccharides, mucoproteins, glycoproteins, glycolipids, ug uban pa) kay na-oxidize sa periodic acid ug gi-convert ngadto sa aldehyde groups (CHO-CHO). Kini nga mga grupo sa aldehyde naghiusa sa walay kolor nga purplish-red Schiff reagent, nga nagporma og purpura-pula nga tina nga nagdeposito diin ang polysaccharides anaa sa selula. Kini nga reaksyon nailhan nga periodic acid-Schiff (PAS) staining, kaniadto gitawag nga glycogen staining.
Pamaagi sa Eksperimento
Mga materyales:Cellulose acetatemembrane, electrophoresis apparatus(DYCP-38C ug suplay sa kuryente DYY-6C), Labaw nga Sample Loading Tool(pipette), spectrophotometer, colorimetric cuvettes, mga buffer.
Buffer:
(1) pH 8.6 TEB Buffer: Timbang 10.29 g Tris, 0.6 g EDTA, 3.2 g boric acid, ug idugang ang distilled water ngadto sa 1000 ml.
(2) Borate Buffer: Timbang 6.87 g borax ug 5.56 g boric acid, ug idugang ang distilled water ngadto sa 1000 ml.
Pamaagi:
Ppag-ayo sa Hemoglobin Solution
Pagkuha og 3 ml nga dugo nga adunay heparin o sodium citrate ingon usa ka anticoagulant. Centrifuge sa 2000 rpm sulod sa 10 minutos ug ilabay ang plasma. Hugasi ang pula nga mga selula sa dugo tulo ka beses gamit ang physiological saline (750 rpm, 5 minuto nga centrifugation matag higayon). Centrifuge sa 2200 rpm sulod sa 10 minutos ug ilabay ang supernatant. Idugang ang parehas nga kantidad sa distilled water, dayon idugang ang 0.5 ka beses ang gidaghanon sa carbon tetrachloride. Kusog nga pag-uyog sulod sa 5 minutos, ug dayon centrifuge sa 2200 rpm sulod sa 10 minutos aron makolekta ang taas nga Hb solution para magamit sa ulahi.
Paghumol sa Membrane
Guntinga ang cellulose acetate membrane ngadto sa mga gilis nga may sukod nga 3 cm × 8 cm. Ihumol kini sa pH 8.6 TEB buffer hangtod hingpit nga mabusog, dayon kuhaa ug pahiran ug pamala gamit ang filter nga papel.
Pagtan-aw
Gamit ug pipette aron makit-an ang 10 μl sa hemoglobin nga solusyon nga patayo sa cellulose acetate membrane (ang bagis nga kilid), mga 1.5 cm gikan sa ngilit.
Electrophoresis
Ibubo ang borate buffer solution ngadto sa electrophoresis chamber. Ibutang ang cellulose acetate membrane nga adunay bulok nga kilid sa cathode end sa chamber. Pagdagan sa 200 V sa 30 minuto.
Elution
Guntinga ang HbA ug HbA2 zones, ibutang kini sa separadong mga tubo sa pagsulay, ug idugang ang 15 ml ug 3 ml nga distilled water, matag usa. Hinay-hinay nga pag-uyog aron hingpit nga matunaw ang hemoglobin, dayon isagol.
Colorimetry
I-zero ang absorbance gamit ang distilled water para sa elution solution ug sukda ang absorbance sa 415 nm.
Pagkalkula
HbA2(%) = Absorbance sa HbA2 tube / (Absorbance sa HbA tube × 5 + Absorbance sa HbA2 tube) × 100%
Pagkalkula sa mga Resulta sa Eksperimento
Reference Range para sa pH 8.6 TEB Buffer Cellulose Acetate Electrophoresis: HbA> 95%, HbA2 1%-3.1%
Mga nota
Ang oras sa electrophoresis kinahanglan dili kaayo taas. Ang cellulose acetate membrane kinahanglan dili mamala sa panahon sa electrophoresis. Hunonga ang electrophoresis kung ang HbA ug HbA2 klaro nga nagbulag. Ang dugay nga electrophoresis mahimong hinungdan sa pagsabwag sa banda ug pagkaburot.
Likayi ang paggamit ug daghan kaayong sample. Ang sobra nga hemoglobin nga likido mahimong mosangpot sa pagkaguba sa banda o dili igo nga pagmantsa, nga moresulta sa sayop nga pagtaas sa lebel sa HbA.
Paglikay sa kontaminasyon sa cellulose acetate membrane nga adunay mga protina.
Ang sulog kinahanglang dili kaayo taas; kay kon dili, ang mga banda sa hemoglobin mahimong dili magbulag.
Kanunay iapil ang mga espesimen gikan sa normal nga mga indibidwal ug kinahanglan nga nahibal-an nga abnormal nga hemoglobin ingon mga kontrol.
Ang Beijing Liuyi Biotechnology naghimo sa propesyonal nga tangke sa electrophoresis alang sa hemoglobin electrophoresis nga mao ang modeloDYCP-38Ccellulose acetate membrane electrophoresis tank, ug adunay duha ka modelo sa electrophoresis power supply nga magamit alang sa cellulose acetate membrane electrophoresis tankDYY-2CugDYY-6Csuplay sa kuryente.
Sa kasamtangan, ang Beijing Liuyi Biotechnology naghatag og cellulose acetate membrane alang sa mga kustomer, ug ang gidak-on sa cellulose acetate membrane mahimong ipasibo. Welcome sa pagpangutana kanamo alang sa mga sample ug dugang nga impormasyon.
Ang Beijing Liuyi brand adunay labaw pa sa 50 ka tuig nga kasaysayan sa China ug ang kompanya makahatag ug lig-on ug taas nga kalidad nga mga produkto sa tibuok kalibutan. Sa mga tuig nga pag-uswag, takus kini sa imong pagpili!
Nangita na kami karon og mga kauban, ang OEM electrophoresis tank ug distributor giabiabi.
Kung naa kay plano sa pagpalit para sa among mga produkto, palihug ayaw pagpanuko sa pagkontak kanamo. Mahimo nimong ipadala kanamo ang mensahe sa email[gipanalipdan sa email]o[gipanalipdan sa email], o palihug tawagi kami sa +86 15810650221 o idugang ang Whatsapp +86 15810650221, o Wechat: 15810650221
Oras sa pag-post: Sep-20-2023